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学会会员黄兵研究员课题组关于鸡球虫入侵及耐药性相关的重要功能基因研究取得新进展
鸡球虫属于顶复器原虫，是专性细胞内寄生虫,需要入侵宿主细胞后，在宿主细胞内生长发育繁殖。目前控制鸡球虫病主要依赖于药物防治，但鸡球虫极易产生耐药性，因此学会理事黄兵研究员课题组把主要工作集中在研究鸡球虫的一些重要功能基因，包括入侵相关的基因——棒状体颈部蛋白(EtRON2)、顶膜抗原（EtAMA1）、钙依赖蛋白激酶（EtCDPK3）等，以及耐药性相关的基因——乳酸脱氢酶（EtLDH）等。对这些重要分子的特性和功能进行了研究，如EtCDPK3是一类重要的蛋白激酶，利用免疫荧光定位和免疫抑制试验发现该蛋白激酶在鸡球虫入侵宿主细胞以及细胞内的生长发育过程中，发挥重要功能。EtAMA1和EtRON2在鸡球虫入侵宿主细胞过程中同样发挥重要功能，对弓形虫和疟原虫的研究发现，这两个蛋白是顶复器原虫入侵过程形成特殊结果Moving Junction(MJ)的重要组成部分，为了弄清楚鸡球虫MJ的功能，利用酵母双杂交技术，筛选了EtAMA1可能的相互作用蛋白，获得了部分基因的EST序列。对抗药性相关基因EtLDH的分子特性也进行了研究。同时将这些重要功能基因构建了核酸疫苗，并对其免疫保护性进行了分析。部分研究内容已在Parasitology、PLoS ONE、Parasitology Research、African Journal of Microbiology Research等杂志上发表。
部分研究结果：
Fig.1 Localization of EtCDPK3 during in vitro DF-1 cell infection by indirect immuofluorescence using antibody against rEtCDPK3 protein. (A) Sporozoites (Spz) were incubated in PBS. (B) Spz incubated in complete medium (CM). Infected DF-1 cells were collected at different hours post infection (p.i.). (C) 2 h p.i., intracellular sporozoites (iSpz). (D) 12 h p.i., intracellular sporozoites (iSpz). (E) 24 h p.i., trophozoites (Tropho). (F) 48 h p.i., immature schizonts (iSc). (G) 60 h p.i., immature schizonts (iSc). (H) 72 h p.i., mature schizonts (mSc) (up) and mature merozoites (Mrz) (down).
Fig. 2. Inhibition of sporozoite invasion in vitro by antibody against rEtCDPK3. Anti-rEtCDPK3, IgG purified from rabbit antiserum against recombinant EtCDPK3 protein; NA, IgG from naive rabbit serum. All assays were performed in triplicate.
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